茚三酮显色问题本人做叶片中游离氨基酸的含量的测定,用的茚三酮法.但是将处理好的混合试剂用分光光度计比色的时候,发现数值会

来源：学生作业帮编辑：搜搜考试网作业帮分类：化学作业时间：2024/05/26 19:31:17

茚三酮显色问题
本人做叶片中游离氨基酸的含量的测定,用的茚三酮法.但是将处理好的混合试剂用分光光度计比色的时候,发现数值会不断地下降,而且很厉害.这是什么原因?将试液放入试管水浴,混合试液颜色会由浅黄慢慢变成深红紫色,取出后过一段时间待试液冷却后,颜色就会慢慢变浅,这是什么原因?哪位高人能解答?
所用试剂：
水合茚三酮试剂：取 0．6g茚三酮置于烧杯中，加 l5ml 正丙醇，令其溶解，再加30 ml 正丁醇，6 0m1 乙二醇，最后加入 9ml pH5．4 0．2M的醋酸盐缓冲液。
PH值为5.5左右的醋酸-醋酸钠缓冲液。
0.3%抗坏血酸
简单说下过程，我测的是竹叶中的游离氨基酸，取材料0.1g，加3ml 0.2M的醋酸迅速研磨，研磨后用滤纸过滤，用缓冲液定容到50毫升。开水水浴10分钟，，目的是沉淀样品中的蛋白质和氧化抗坏血酸．然后冷却。然后在另外的试管中加入3ml茚三酮，1ml缓冲液，1ml样液，0.1ml抗坏血酸，再水浴10分钟，冷却，稀释。580nm测吸光度！吸光度读数基本是1-2秒就减少1，10分钟内能从300多掉到100多。该取哪个读数？真不清楚中间是怎么个原因。是不是氨基酸浓度太低？因为感觉我做的空白对比读数下降的更快。另外我的样液水浴后是呈红葡萄酒那样的深红紫色，这是不是就是书上所谓的蓝紫色？

我觉得楼上的解答有个不妥之处：楼主说明了过程,无论是反应前试样的处理还是反应后的测定,都是冷却了的.所以,温度这方面应该不会影响测定了.而楼主担心的氨基酸浓度过低这种假设可能也不会很大,因为茚三酮的显色反应检出下限很低,只要有几微克的氨基酸都能检测出来.
所以我分析可能有两个原因：
1,pH值的影响.楼主在实验中两次用到缓冲液调节pH=5.5,但是在最后显色的一步是在加热的状况下进行的.没有在反应过程中检测pH值的变化,导致颜色不是Ruhemann紫.而茚三酮与氨基酸作用得到的蓝紫色物质是一种铵盐.从结构上看,季铵和还原的酮的氧连在一起,这本来就是个亚稳定结构.季铵盐容易把H+给O得到一个羟基,所以很依赖pH的变化.那么你的溶液不停变化吸光度就能解释了,是由于Ruhemann紫因pH不适不断释放NH3或NH4+的结果.这个情况一般是由于pH值过大引起的.
2,没有反应完全.在进行样品沉降时其实很有可能残留了许多蛋白质和多肽.多肽和蛋白质也能形成这个反应,但是肽越大反应就越不灵敏.所以有可能是第三产物,中间得到的醛可能会影响了这个反应,可能会生成其他带有颜色的副产物干扰紫色的呈现.但是在逐渐反应后,醛由于大基团逐渐分解对反应的影响越来越小,这个干扰也就变小了,实际的紫色浓度自然比原来要弱许多.
以上只是个人推测,没有依据.建议你用其它方法测定,比如用茚三酮作显色剂的纸层析色谱,不仅可以计算总量,还可以初步估计氨基酸种数.

茚三酮显色问题本人做叶片中游离氨基酸的含量的测定,用的茚三酮法.但是将处理好的混合试剂用分光光度计比色的时候,发现数值会土壤中有效磷的测定是采用钼锑钪比色法测定,然后用分光光度计测量吸光度,但是做标准曲线的空白,显色的时候总是有颜色,试剂重氨基酸与茚三酮的显色原理?/// 氨基酸与茚三酮的显色原理为什么茚三酮可以使不同的氨基酸显色分光光度计测定铁含量的空白试剂要加显色剂吗? 茚三酮显色剂与氨基酸显色时,是与氨基酸的哪个基团反应,条件是什么茚三酮能使阿尔法氨基酸显色外,还能对什么结构的化合物显色? 茚三酮与氨基酸的反应机理谁知道如何配制显色剂0.2%的茚三酮溶液如何配制显色剂0.1%的茚三酮溶液如何配制显色剂0.2%的茚三酮溶液