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重组质粒构建 一个DNA为什么要接入两个不同的载体?

来源：学生作业帮 编辑：搜搜考试网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/06/05 04:42:04
重组质粒构建 一个DNA为什么要接入两个不同的载体?
重组质粒构建方法
将从荧光假单胞菌2P24基因组中克隆的
phlD基因与载体pMDl8一T相连,构建重组质粒
pMDl8一T：：phlD,并将该质粒上的phlD切下与
载体pET28a(+)相连,构建pET28a(+)：：phlD,
转化E．coli BL21(DE3)．用DNA酶切图谱、DNA
测序等方法筛选阳性克隆子．
与一个载体连接之后 又重新切下来再接到另外个载体中 这是为什么?
重组质粒构建 一个DNA为什么要接入两个不同的载体?
哈哈,我就是做这个的,因为基因直接克隆出来,酶切得不太好,而且也不容易连到PET上面,而PMD是克隆载体,上面添加了多聚T,PCR的产物末端通常会多P出几个多聚A,A和T互补,再用连接液连接,就非常容易连上,PMD是高拷贝质粒,将会复制出很多质粒,再酶切提出里面的目的片段,连到PET上就相对容易了
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