第一次做转染试验,请问怎样计算转染率,载体是带GFP的,就是弄不明白是用荧光的个数比上接种细胞总数吗

来源：学生作业帮编辑：搜搜考试网作业帮分类：数学作业时间：2024/06/06 09:30:11

第一次做转染试验,请问怎样计算转染率,载体是带GFP的,就是弄不明白是用荧光的个数比上接种细胞总数吗
还是说转染几天后细胞的个数,还用分死细胞和活细胞吗?可是图片上根本数不过来.还是数视野中有多少细胞,有多少荧光,具体是怎样比?

转染率是大概估计一下,有荧光的占总细胞的比率,如果要精确值可以去做流式.
再问：请问具体做流式要怎样做，能说具体一点吗？转染率很低做流式会不会没效果？比如不到1%，那流式可以测出来吗？
再答：你的转染目的是什么？如果后续还有其他功能实验需要转染率很高才可以，如果过低影响实验结果，可以通过流式分选富集阳性细胞继续培养，1%肯定太低了，至少也要百分之几十才可以。如果转染是为了包装病毒的话，转染率要80-90%以上才会有很好的出毒效果。做流式需要用到流式细胞仪，这个有专门的试剂盒，如果只是简单的看转染率，直接过一遍就可以得出数据，如果后续做实验需要阳性细胞，需要把阳性细胞分选出来。流式细胞仪一般都有老师负责操作，如果你们实验室没有，可以去其他实验室或学校做。如果还有问题可以加我qq，42163795

第一次做转染试验,请问怎样计算转染率,载体是带GFP的,就是弄不明白是用荧光的个数比上接种细胞总数吗想请教您关于流式的问题,用一个双荧光载体转染细胞,其中用RFP验证转化效率,GFP验证工作效率质粒转染细胞第一次预实验转染效率较好,再做就转不进去了或者转染效率不到5%,是质粒反复冻融的问题吗? PF用带目标基因的质粒(pEGFP-N1）转染HepG2细胞,用G418筛选稳定表达株10天,GFP表达减弱减少. GEP转染细胞能不能用Annexin5和PI双染检测凋亡,GFP的荧光会不会影响流式检测的结果 siRNA转染肝癌HEPG2细胞,沉默miRNA是什么意思?是为了沉默miRNA的靶基因吗?需要构建质粒载体吗? 我想转染淋巴细胞,是一种悬浮细胞,请问什么转染方法较好? siRNA转染细胞的方法满病毒转染后带绿色荧光的待检细胞要去做流式,测凋亡,应该用什么凋亡试剂盒呢? 真核表达分泌型蛋白,有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定,那么转染之后上清和细胞怎样收样? 有人没有转染过NK细胞啊?应该用什么转染试剂啊?这是一种悬浮细胞. 转染的cas9质粒在细胞中能复制吗