细胞培养传代时细胞抱团怎么办

来源：学生作业帮编辑：搜搜考试网作业帮分类：综合作业时间：2024/06/04 15:14:09

细胞培养传代时细胞抱团怎么办
我在培养细胞时,消化后细胞经常是抱团的,这样在计数细胞的时候让我很难办.有哪位高人能指点一二,让我把细胞吹成单个的,谢谢!
我养的HELA细胞消化后可以吹打下来，可就是总抱成一团一团的，离心后也很难用乳头吸管吹散，我想问的是这样要怎么办，因为这样接板的话细胞数会不准，影响结果。感谢大侠们赐教啦

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后,继续生长的空间不足,培养基中的营养成份也消耗较多,同时代谢废物也有较多堆积,需要分瓶培养,对细胞进行传代扩增.对于贴壁不太紧的细胞如293,可以直接吹散后分瓶.而对于贴壁较紧的细胞如CHO,则需要以胰酶消化后再吹散分瓶,一般过程为(以下操作均按无菌操作的要求进行)：将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去;加入0.25%胰酶溶液,视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多,以使充分浸润;一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察瓶壁半透明的细胞层,当见到出现细针孔空隙时,弃去胰酶溶液,并加入适量的细胞培养液终止消化;视实验要求分入多瓶继续培养,一般为一传二到一传四的比例.
这里,胰酶消化的程度是一个关键：消化过度则对细胞的活性损伤较大,并有部分细胞漂浮,随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下,反复吹打同样也会损伤细胞活性.影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等.以笔者的经验,以轻吹或加培养液后轻摇可下较好,但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的.

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