搜搜考试网怎样从基因文库中提取目的基因
来源：学生作业帮 编辑：搜搜考试网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/28 19:45:56
怎样从基因文库中提取目的基因
PCR技术是DNA扩增技术,它能在比较短的时间内产生大量的DNA.在获取目的基因后才使用PCR技术.
获得目的基因的方法：
一、构建基因文库
提取总DNA.
用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆（gene clone）
将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库（gene library）.
二、反转录人工合成互补DNA
细胞核中转录的mRNA,已经加工去除内含子,只有外显子（编码蛋白质的序列）,比构建基因文库优越,因此,先从细胞中提取所需的mRNA.
以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成互补的DNA片段(complementary DNA,cDNA),在逆转录完成时,mRNA被降解.在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下,再以第一条DNA为模板,合成另一条互补DNA链.
优点 在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA.因此,用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因.
再问： 顺便问一下鸟枪法，鸟枪法是在基因文库的基础上进行的，还是构建基因文库的方法就是鸟枪法？我这一点很不明白。
再答： 给你个概念`你看看 鸟枪法是将目的DNA随机地处理成大小不同的片段，再将这些片段的序列连接起来的测序方法。大致步骤 1.使用限制性内切酶将带有目的基因的DNA链切成若干小段。 2.再使用DNA连接酶将其整合到载体的基因中,并使其表达。 3.如果在某个细胞中得到了目的产物,就说明整合到该细胞中的DNA片段就是所需要的DNA片段鸟枪法优点是速度快，简单易行，成本较低。 ......懂?
获得目的基因的方法：
一、构建基因文库
提取总DNA.
用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆（gene clone）
将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库（gene library）.
二、反转录人工合成互补DNA
细胞核中转录的mRNA,已经加工去除内含子,只有外显子（编码蛋白质的序列）,比构建基因文库优越,因此,先从细胞中提取所需的mRNA.
以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成互补的DNA片段(complementary DNA,cDNA),在逆转录完成时,mRNA被降解.在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下,再以第一条DNA为模板,合成另一条互补DNA链.
优点 在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA.因此,用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因.
再问： 顺便问一下鸟枪法，鸟枪法是在基因文库的基础上进行的，还是构建基因文库的方法就是鸟枪法？我这一点很不明白。
再答： 给你个概念`你看看 鸟枪法是将目的DNA随机地处理成大小不同的片段，再将这些片段的序列连接起来的测序方法。大致步骤 1.使用限制性内切酶将带有目的基因的DNA链切成若干小段。 2.再使用DNA连接酶将其整合到载体的基因中,并使其表达。 3.如果在某个细胞中得到了目的产物,就说明整合到该细胞中的DNA片段就是所需要的DNA片段鸟枪法优点是速度快，简单易行，成本较低。 ......懂?