如何提高引物扩增的特异性

来源：学生作业帮编辑：搜搜考试网作业帮分类：生物作业时间：2024/06/01 12:33:21

如何提高引物扩增的特异性
现在合成了几对引物,要把一个基因扩出来,怎么提高特异性?升高PCR的温度了,做了8个温度梯度,跑电泳,最高温没有条带,最低温很多条带,中间的其次,请问是不该降低镁离子浓度?该降到多少?

1,镁离子浓度过高会降低pcr扩增特异性,我做过镁离子浓度梯度,最佳的浓度是要摸索的,比如我的实验中,最佳的是2.5mM,因为我的模板是我自己提取的,可能质量不好.
2,你也要考虑引物的设计是否存在问题,用软件分析下引物的特异性好不好.
3,可以考虑用高保真聚合酶,如pfu,特异性极高,错误率低.
pcr的很多因素都要自己摸索,不仅仅是温度.尤其是当模板是自己提取的时候,可能残留有乙醇,EDTA等影响pcr酶活性的物质.（当初扩增一个基因,花了我将近半个多月^_^）

PCR引物设计不好,如何提高引物特异性? 什么是PCR引物的特异性 pcr扩增中,如何设计引物? 特异引物PCR问题各位大牛,小弟初涉分子生物实验,最近在用设计好的特异性引物扩增保守序列,可是总也是扩增不出来,常常是只 PCR扩增时引物的位置 PCR扩增正向引物,反向引物是什么?怎么结合的? 如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢谁能通俗易懂的给我解释一下PCR反应过程中,引物与模板如何结合?扩增出来的是上下游引物之间的片段呢? 在进行PCR实验扩增时如何设计引物?为什么要用引物?原理是什么? pcr 扩增产生大量引物二聚体的原因 PCR扩增DNA的操作里为什么要用引物?