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水饱和酚和Tris-HCl饱和酚有什么不同?

来源:学生作业帮 编辑:搜搜考试网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/03/28 22:24:48
水饱和酚和Tris-HCl饱和酚有什么不同?
在DNA和RNA的提取上,水饱和酚和Tris-HCl饱和酚有什么区别吗?
水饱和酚和Tris-HCl饱和酚有什么不同?
水饱和酚和Tris饱和酚( Phenoi Water/Tris-phenol)的区别:
一、水饱和酚又叫水平衡酚.水饱和酚的PH小于7,一般是PH为5.0左右,通常与异硫氢酸胍一起使用,用于细胞RNA的提取,在酸性环境中,DNA在酚相,RNA在水相.两者就分开了.
二、Tris饱和酚一般PH大于7.8,用于DNA的提取.其中,酚是强的蛋白变性剂,可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出.而Tris的主要作用是防治止酚类氧化,若酚类氧化,则会形成醌(两个苯环),醌含有强自由基,会破坏核酸结构.同时,由于PH值大于7,在碱性环境中DNA处于水相,RNA处于有机相.从而分离上清,即可得到DNA.
Tris饱和酚的配置:
1、冰箱取出重蒸酚,室温放置---68度水浴溶化,切勿立即放入68度的水浴中,以防玻璃炸裂
2、加8-羟基喹啉至0.1%和β-巯基乙醇至0.2%,(原液14.4MOL/ML),混匀,溶液呈现黄色,倒入分液漏斗中(也可在烧杯中进行)
3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后,静至分层;放出下层黄色酚液,弃上层
4、加固体Tris约1g/100ml酚,摇匀,去水相
5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次,至PH为8.0
6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存
7、如黄色消失或呈粉红色(说明酚已经被氧化),则不能使用