搜搜考试网电泳图中,如果能看到小片段,那么大片段就特别亮,如果大片段亮度正好,那么小片段就看不到,这个问题怎么解决呢?
来源：学生作业帮 编辑：搜搜考试网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/06/11 04:43:21
电泳图中,如果能看到小片段,那么大片段就特别亮,如果大片段亮度正好,那么小片段就看不到,这个问题怎么解决呢?
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你做的是酶切么.切下来的片段,一条大,一条小,一条亮,一条暗……
酶切的话,你想,你切1ug10kb的载体,切下来的片段一条8000bp,一条2000bp,那么8000bp的有800ng,当然亮；而2000bp的只有200ng,自然是暗了.
染料的亮度是与DNA多少成正比的.
再问： 那怎么能都亮度适中呢，不能亮成一片，也不能暗的太轻？
再答： 。。。这个主要看染料和胶的，一般DNA量在100ng-1ug范围内，只要胶制得好，染料染得好，出来的条带都很好看的。
再问： 我的体系中DNA的量在500ng-1ug之间，大片段还行，就是小片段就很弱了
再答： 你只是做酶切回收自己看看的话，只要能看到，能判断切下来了没就可以了。 要作图的话，可以多切点（可能会导致切不完全，适当增加体系或酶量）或者略微多加些染料（多加染料会使图变得很难看，比如EB的背景荧光会更亮，gelred会导致拖带等等），也可以用后期处理图片，增加对比度，让小片段更显眼些。
你做的是酶切么.切下来的片段,一条大,一条小,一条亮,一条暗……
酶切的话,你想,你切1ug10kb的载体,切下来的片段一条8000bp,一条2000bp,那么8000bp的有800ng,当然亮；而2000bp的只有200ng,自然是暗了.
染料的亮度是与DNA多少成正比的.
再问： 那怎么能都亮度适中呢，不能亮成一片，也不能暗的太轻？
再答： 。。。这个主要看染料和胶的，一般DNA量在100ng-1ug范围内，只要胶制得好，染料染得好，出来的条带都很好看的。
再问： 我的体系中DNA的量在500ng-1ug之间，大片段还行，就是小片段就很弱了
再答： 你只是做酶切回收自己看看的话，只要能看到，能判断切下来了没就可以了。 要作图的话，可以多切点（可能会导致切不完全，适当增加体系或酶量）或者略微多加些染料（多加染料会使图变得很难看，比如EB的背景荧光会更亮，gelred会导致拖带等等），也可以用后期处理图片，增加对比度，让小片段更显眼些。