PCR技术需要多少种引物
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/04 18:38:41
这篇文章有详细描述:http://www.springerlink.com/content/h083177466217382/引物OY1(AATAACTTTTCGAATCGCAT)OY2(AAGACT
你理解的不错,每次复制都需要消耗一对引物.不过原理还是要好好学哦.首先引物是论“对”就是两条(rapd等特殊pcr用单条,lamp用6条……算了,那个不是pcr),这n对引物是完全一样的.不要说“段”
因为DNA聚合时需要3‘OH,这个只能由引物提供(没原因,就因为是那样).这个引物是一小段RNA,引物绝对是RNA,而不是DNA.看看DNA复制需要什么酶就知道了,需要依赖DNA的RNA聚合酶(DDR
1、DNA聚合酶不能从头合成,在细胞内先由引物酶控制合成一段单链RNA做引物,然后在RNA引物后面将脱氧核苷酸加上去.2、PCR技术是体外扩增DNA的技术,需要我们自己加一段DNA单链做为引物.再问:
体内DNA复制也是有引物的,你好好再看看课本吧.引物在PCR以及DNA复制中的作用就是起到引导DNA聚合酶结合和开始聚合反应的过程.
是一段特定的DNA序列,可以在退火温度下和模版链特异性结合,引导PCR体系中的dNTP根据与模版链碱基配对原则延伸出一条新的链.引物的序列是根据你要扩增的DNA序列而设计的.
引物本来就是单链的.书上画成双链才怪.PCR所用的DNA聚合酶只能顺着已经存在的一小段DNA的尾巴来接着合成,它不会自己起头.引物就是这么一小段用来起头的DNA.DNA本身很长很长,我们扩增时,只能扩
引物的功能是作为核苷酸聚合的起始点,引导DNA的合成.能设定循环次数,及控制复制次数.PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度.一般的循环次数选在30~40次之间,循环次数越多,非特异性产物的量亦随之
不需要复制,引物是配比好的,请看PCR的原理.
引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点,在细胞外的条件下,只有通过引物,DNA才可以开始进行复制.引物是已知序列的DNA小片段.
DNA复制的引物是一小段RNA,由引发酶合成.由于DNA聚合酶不能从头合成,所以必须先由一段RNA引导,在复制完成后除去,再用DNA代替.当然,在另外一些DNA复制模型中,末端的茎环结构也可以引导DN
我使用的引物一般稀释到10μM.20微升体系每个引物加0.4微升即可.你的50微升体系加1微升也不算多.你降低下退火温度试一试.
最好不要有引物二聚体的产生
因为PCR中,DNA聚合酶不能特异性的起始,需要先形成一段双链DNA来作为复制起始的位点,所以就需要引物(一小段单链DNA)来形成复制起始位点.
一小段寡聚的DNA,一般有两个(一对),分为上游引物和下游引物,分别指导DNA两条链的聚合.它们主要作用有两个,一个是和模板特异性结合来指导taq聚合酶合成所要的片段.一个是提供一个3‘端的-OH末端
引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链.体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针
不需要,加入体系中的引物量是过量的,同样过量的还有dNTP,完全可以满足PCR多个循环的需求
不会脱落,因为引物的组分就是普通核酸,没必要让它再脱掉.PCR不像在生物体内一样,中没有那种降解酶H.要是有特殊要求的可能要脱.
单纯的PCR技术只需要一种酶——TaqDNA聚合酶.
没错,DNA的两条连是互补的,但是引物绝对不可以互补.引物是放在DNA两条连的各一端引导游离DNA上DNA链,不仅不可以互补,还要尽可能的不同.