设计出来的引物BLAST后发现与其他基因的引物存在相同碱基,有个数限制吗

这里有primerblast,使用相当方便,就是网速有点慢

不能需要注册器

引物的设计一般要考虑以下几个问题：1.长度,至少要16bp,通常为18-30bp2.解链温度（Tm值）3.避免引物内部或引物之间存在互补序列（3个碱基）,从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的

请用primerexpress设计就行.你想去找非常保守的区域设计引物?可以,那你把这个物种的所有亚种的此段DNA序列做一个保守型分析就行.一般来说clustalX就可以了.再问：ClustalX排列

不用那么复杂网上那都是扯淡的主要是这么几点注意的：1.碱基组成,GC的含量2.引物长度3.不能有反向重复和自身互补序列4.Tm值5.3端最好为G或C等等设计时最好用软件弄一下不用面面俱到没有太大问题就

怎样用primer-blast设计引物http://wangyufeng222.blog.163.com/blog/static/128222070201110511213331/

这样就P不出来的啊要换模板的必须要比目的基因要长再问：谢谢。只能重新设计了。

什么跟什么说的太不清楚饿了只要你需要的那段序列是对的不就行了嘛跟引物序列有啥关系毕竟大部分的PCR引物设计都是在需要的序列两端隔一段距离而且如果你测序是拿PCR引物测的话那前面的几十个碱基都是测不准的

引物可以通过一些软件设计,比如primer5,但是还需要注意一些细节问题.比如1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计.DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的.在NCBI上搜索不同物种的同

如果你测定的基因序列未知,可以用同源基因或者别的物种的同类基因序列来设计引物,进行PCR,看看是否能够扩增出产物,并对产物进行确认,判断扩增的特异性.如果确认无误,就可以进行荧光定量PCR.再问：我想

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/194473617?report=genbank

您应该使用巢式PCR来做这个实验.无论您是先提RNA再做反转录,还是直接从DNA中获得基因,考虑到模板的复杂性,都应当使用巢式PCR.建议您先从目的基因的上下游设计一段引物,即外引物,再根据目的基因上

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段

Tm值本来就是人为定的一个预测值,三个Tm值代表的是不同的计算方法,常用的是第三种2*AT+4GC.看退火温度时,酶切位点和保护碱基一般是不考虑在内的,因为pcr扩增时这段序列一般是不跟模板结合的,所

跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.

没事,这个可以,你应该是把设计的上下游引物都进行了比对,前两个比对结果应该就是上游、和下游引物,假设你第一个结果是上游,第二个结果是下游.那么第三个结果也就是下游比对结果,下游结合的位置距离上游、下游

一般使用primer5就挺好,不知道你是扩基因还是启动子,基因是否是已知.PCR引物设计原理:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关

不用太纠结,有点儿具体也是可以的,一般都能P出来.再问：很多mRNA选择设计不同长度的引物，没有一对是无found显示的，真的很让人纠结；请问文献上的引物有的也是这样吗，不完美，但能扩出来，不会影响q

我觉得不用吧计算Tm和退火不是算的双链部分的嘛不用计算附加碱基,如果要调整PCR的特异性,只是提高退火温度就好了,这个提高不是以附加碱基为基础的.克隆实验倒是无所谓,如果你是要在附加碱基中加入一个小T

有基因序列号,你就可以直接上genebank下载其序列,下载到全序列,你需要扩增的CDS区,也就是编码区,可以全外显子扩增,这样简单一点,也可以做cDNA克隆,然后再做,前者的话就可以直接根据其基因序