搜搜考试网蛋白电泳TCA 丙酮变性还是不变性
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/14 19:39:17
我以前提的蛋白用的是TCA-丙酮法,可是跑了好几次,电压都升不上去,谷友们说可能是盐离子浓度过高,但是我用超滤的方法试了,电压还是升不上去,我只有重提蛋白,（我还是想用TCA-丙酮法）但我不知大家在用
丙酮好象还可以破坏蛋白表面的水化膜,降低蛋白质水溶液的介电常数,从而沉淀蛋白． 莫非只是用来抽提tca 疑惑ing
两者原因,可能是PCR体系没设计好,或者是胶没制好,跑电泳时注意保持电流恒定再问：多谢指教！跑电泳时我用的是恒功率，这个影响会很大吗？最近在做SSR标记有点迷茫！
称10gTCA加入到100ml丙酮中即可!或者100%tca的配置再装又500mltca的瓶中加入227mlddH2O溶解即可
其实准确的说塑性变形时是有体积变化的,只是它很微小,就忽略不计了.塑性变形时,包括晶粒内部变形和晶界变形,晶内变形又包括滑移和孪晶,这些变形并没有导致晶体的点整常数的变化,所以宏观上看只是体积转移了位
以醋酸纤维薄膜为支持物,浸入ph8.6的缓冲液后吸去多余液体.将微量血清点于膜上,经电泳后,将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色,洗去多于染料.将膜条烘干,再将其用透明液进行透明处理.用光密度计或凝胶成
厚百很高兴为您因为干燥时间太长,一般干燥是沉淀为半透明状就可以了.
大部分蛋白是可以室温干燥的,因为有机溶剂挥发很快,室温干燥花不了多少时间,蛋白质来不及变性.如果想再快一点,可以使用旋转蒸发干燥器.
用这个方法复溶蛋白时很难完全溶解掉,样品处理很是个问题,应该是蛋白浓度不高.我做过类似的也是用这个方法,电泳出条带很浅甚至没有,很郁闷.再问：那你后来是怎么解决这个问题的呢？是bufferB溶解的时候
可能有几个原因：一：上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看（你所用的缓冲液是不是很久了?）二：如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三：不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是
目的蛋白加上标签蛋白的总分子量,当然会有误差.像GST这种标签很大的,有30kd左右.而FLAG,HIS等都比较小.
Tris-Gly与TAE、TBE两者的离子强度不同,用来跑DNA可能不行三磷酸腺苷(站内联系TA)补充,你跑native或者EMSA胶一类的,可以用TBE跑蛋白或者蛋白－核酸复合体yaoyl0679(
发黄是因为被氧化了,会变质成丙酮酸,其性质也会发生改变,最好别再用了
需要用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,一般是加入SDS,有多条肽链的蛋白质由于变性彼此分离,又因为不同的分子量在凝胶的迁移速度不同,因此形成不同的条带.
因为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得前提是,要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集,所以只有“充分变性”才能更好的“解离”,不然影响效果,准确点说,根本做不出来.
不好.
1蛋白变性后是不具有生物学活性的.2ELISA是无法检测蛋白活性的.
蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变,从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失,这种现象称为蛋白质变性.
后加电泳液的话液体溢过胶体时的流动容易把蛋白质样本冲出其所在的井.而且这样做容易在胶体四周留下液体无法进入的空隙,可能影响电泳效果.应该是这样