荧光pcr内参过大

荧光定量PCR和实时荧光定量PCR是一样的啊

看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?再问：不知道，我是个新手什么都不懂再答：那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来

相对定量有两种方法.要求扩增效率相同的是ΔΔCt法,因为只有扩增效率相同目的基因与内参基因的Ct值之差才是恒定的值,这是使用这种方法处理数据的前提,所以正式实验之前要进行条件优化,这种方法的优势是不用

朋友,首先跟你说一下我的经验,其实这里有个误区,其实普通PCR对RealtimePCR的指导意义实在是太小,因为realtimePCR的引物跟普通PCR的引物有很大差别,realtimePCR的引物因

这要看你内参照的意思是什么了,如果是防止假阴结果,比如PCR体系受抑制之类的,如果有内参就知道这个结果是被抑制了还是真阴性结果,这时内参探针设计非常简单,就是将目标探针中间几个点突变一下,内参引物和靶

完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你

RT可能含义：reversetranscribe是逆转录,那么相应pcr应该是由rna凡转录cdna过程realtime实时定量那么就是荧光定量pcr了

1,首先需要根据三个目标基因及Actin的序列设计四对引物,引物设计原则同普通PCR引物,网上有很多介绍的,最好其中一个引物是结构基因部分序列+内含子部分序列这种模式.序列长一些25++,退火温度高一

内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH,actin.或者18srRNA也可以.如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致.如果出入很大,说

根据你的问题简洁回答一下:第一.应该一起看.从你1.7乘以10的4次方copies/ml的数据可以证明你是乙肝小三阳患者.一般来说,小三阳的病人体内的病毒量较小,传染性也不强.乙肝大、小三阳只是乙肝病

是的,你需要用等量体系分别用每对引物进行PCR.实际操作时,我们要求至少3份biologicreplica,用来检测你所测到的表达变化确实是因为实验组与对照组之间的差别.同时这3份biologicre

博凌科为-为你如果lz确实已经确定该基因SNP位点以及突变型,你可以选择荧光定量PCR进行检测,检测方法是：1、探针设计在突变位置,有几个突变点设计几个（不同突变型需要不同的荧光标记：例如,野生型探针

啥都没有的话是无法设计的首先你可以克隆获得内参的序列,再进行下一步实验再问：如果是想用18srRNA这个内参，我该怎么设计引物来得到这段序列呢？再答：这个在各个物种中的同源性很高的，你可以直接用其他物

一般参考标准是1.0E+03,也就是1000,你现在是已经是4.657E+07,也就是46570000了,很高了,请及时治疗吧.

问题有可能如下：1）模板制备有问题.你可以用普通PCR扩增,然后电泳确定是不是模板有问题?2）引物问题：引物设计的好与否,对Realtime结果至关重要!可以用普通PCR确定你的引物扩增效率如何?模板

那是内参引物可能有问题,建议重新设计内参引物

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一个是RT-pcr,reversetranscriptionpcr的简写一个是real-time,一般不会简化为“rt-pcr”,又称实时定量pcr,Q-pcr,应该就是你说得荧光定量而你要测mRNA

actin如果都扩不出来那不是反转有问题就是RNA已经降解了.建议检查这两步的样品.建议检查程序,重新反转,如果还是扩不出来的话,重新抽RNA,再不行,回家过年吧.

荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品的初始模版.