lncrna引物是根据CDNA序列还是CDS区

如果是用在原核上,没有多大的却别,但是如果用在真核上,cDNA扩增出来的产物就比DNA直接扩增出来的短.因为cDNA是RNA逆转录过来的,而DNA里面除了RNA上面相对的片段还有内含子的片段,在扩增的

你的realtimePCR扩增的是cDNA啊,因此用CDS序列啊.

1.首先这应该是个融合表达载体.应该考虑后面的读码框问题.就是应该适当在后面的酶切位点前加入0-2个碱基.使得你的目的基因和egfp在同一读码框内.2.KOZAK序列在真核细胞中表达有作用,这就看你后

1.登陆NCBI网站2.在上排找到BLAST,点击进入,我只用过Oldblast,你可以点击Oldblast的连接进入.3.找到Searchforshort,nearlyexactmatches,点击

理论应该用CDNA进行因为设计,但要保证你提取的mRNA的质量,尽量减少降解.可以在原序列基础上先写出互补序列再进行引物设计.

逆转录reversetranscription：以RNA以模板合成DNA的过程,是RNA病毒的复制形式,需逆转录酶的催化.其过程先以RNA为模板,合成RNA/DNA杂化双链,然后水解RNA链,再以剩下

cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5‘至3’,所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.

反转录失败或者RNA质量不好再问：有没有可能是引物的设计不好？（引物二聚体的范围是在100bp左右）如果是cDNA反转录不好，该如何检测呢？谢谢再答：有可能是引物的问题；在P目的基因的时候，建议你同时

基因bank里面有~

查到的是cDNA,直接粘贴就可以.

直接设计只要包含了整个CDS区就可以再问：哦，那CDS和ORF是一样的吗，怎么查找基因的CDS区啊再答：恩差不多回事ORF是DNA上的CDS是mRNA上的看你模板用的是基因组DNA还是cDNA了反正就

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

不,需要两条,因为随着你PCR的进行,另一条互补链会被引物扩增出来,因此你需要两条引物都加进去.再问：那么我引物设计的时候，是不是以mRNA为模版与以CDNA为模版设计的引物都可以？再答：都可以，别忘

是的,是单链.想获得双链,请看如下：为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementaryDNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链.与RNA链

是的,就是你所想的一样.

这要具体分析.一种可能是你的PCR产物是非特异性片段,所以长度不一,这可以通过和你预期PCR产物的长度进行比较来判断.另一种可能是该基因在不同情况下有不同的剪接模式（alternativesplici

1、理论上所有表达出来的mRNA都能够被转录成cDNA,所以合成的cDNA含有目的基因和内参基因.获得的cDNA是不是扩增的总RNA的全长,要看究竟有多长,一般2kb左右能得到全长,由于逆转录酶效率的

只含有引物往前的一段序列一条mRNA上只有一个基因所以不存在什么下游所有基因而且反转录是从mRNA的3‘到5’走的.再问：原核生物的mRNA怎么会只有一个基因呢？原核生物的基因不是以操纵子形式存在的吗

引物设计与编码链与模板链都没有关系,根据你讲的后期表达,说明需要表达出这种蛋白,那么你的PCR应该是以这段基因的mRNA为模板来设计引物,这样才是外显子所需要表达翻译的蛋白.生物都是基因转录mRNA为

引物二聚体跑的最快,速度超过了loadingbuffer指示剂.二聚体条带弥散,若你的目的片段和此片段有差距,基本可断定此为二聚体