感受态细胞转化后放置37提出,孵育40min-60min什么道理?作用?

质粒转化应该比较容易,要检查一下引物对不对.其次是你的模板够不够,因为农杆菌中质粒拷贝数很低.可以提出质粒后再来PCR再问：嗯，载体上没有通用引物，我是用基因特异引物做的。摇菌时我要了24个小时呢，本

BL21（DE3）PLySs,转化后37℃慢摇45-60min吧,不加任何抗生素.pET28也没什么特殊tag,没影响的,就是很容易出包涵体的.

因为这时候抗抗生素的基因还没有表达出产物,加入抗生素会把细胞杀死.不过青霉素是个例外,因为青霉素只是阻止细菌细胞壁的合成,而不是直接杀死细胞,所以它只是抑制增殖,细胞还可以存活,然后表达抗青霉素基因,

转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子,根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率,公式如下：转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积转化频率（转化子数／每ug质粒DN

两个目的：①热激后的大肠杆菌细胞比较脆弱,培养可以恢复细胞的活性；②进一步培养,提高菌液中大肠杆菌的浓度.

一般保存是在-80摄氏度,-20度可以放一段时间,但不能太长.底部有沉淀正常,甘油只是悬浮菌体,而不能溶解,久了就会沉淀下来!转化质粒失败是其他原因,最大可能性是感受态无活性,建议重做感受态,及做即用

冰浴过程中,原来加在溶液中的钙离子和细菌细胞膜结合,在低温下形成液晶结构,这样,在42度热激下,这种液晶结构收缩,将细胞膜扯开孔道,使DNA进入细菌细胞中.这就是原理.前面冰浴不清楚,热激我认为是让已

问题不大,再用预冷CaCl2悬浮即可.

可能性很多.1、感受态不好.“待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）”,你测OD了吗?其实很麻烦,建议稍微有点混就好用了；感受态细菌在无抗生素培养基上能否生长?2、菌株与质粒不兼容.3、转

温育就是让感受态回复一下状态,以及一些相关抗性基因的表达,毕竟从-80的环境中取出,需要一段时间适应,然后方可转化.

1.将冻存的菌种1：100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养.2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h.3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4

要看你做的是什么了.大肠杆菌感受态根据用处的不同,也有很多种类,比如比较常见的TOP10、DH5α,质粒保存较为稳定的JM109、STBL3,表达所用的BL21等等.除此之外,植物基因转化常用土壤农杆

冰浴是为了质粒附着在菌体表面,热击是打开通道让质粒进入,觉得LZ的做法影响不大,不过要实际验证

影响感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项：1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株OD600为0.

感受态细胞你先用稳定浓度的高纯质粒测一下效率,如果达不到10的5次方就别用了.如果效率挺高有6或7次方而转化子不多,那么就和你构建的质粒有关了.制备感受态,一个要快,二要一直保持细胞在冷冻状态,所有e

影响感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项：1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株OD600为0.

1.感受态细胞没有制备好2.重组子整个就没有导入进细胞里再问：还有没有其他原因。。。。不够多~谢谢哈就算是重组子没有进入细胞内，那也应该还有白班，可是我的是什么颜色都没有再答：质粒上的抗生素抗性，没有

这是用热激法进行的转化.以大肠杆菌为例,大肠杆菌在0摄氏度的氯化钙低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42摄氏度短时间热冲击处理,促

对照组被污染了,或者氨苄有问题,或者在配制培养基的时候在培养基还没冷却的时候就加了氨苄.其实大肠杆菌感受态可以买的,又不贵.自己做太麻烦了.我已经说了啊,可能是对照的大肠杆菌被污染了,或者这些大肠杆菌

电击法是利用高压脉冲,去处理细胞,在细胞膜表面形成一个20~40nm的瞬间空洞,这样外源基因就可以扩散进入细胞内；而氯化钙法是将处于对数生长期的细菌置于0℃的cacl2低渗溶液中,使细胞膨胀,同时ca