定量PCR的溶解曲线group是1-搜答案-搜搜考试网

荧光定量PCR和实时荧光定量PCR是一样的啊

朋友,首先跟你说一下我的经验,其实这里有个误区,其实普通PCR对RealtimePCR的指导意义实在是太小,因为realtimePCR的引物跟普通PCR的引物有很大差别,realtimePCR的引物因

这个一般是用SYBYGreen作为荧光染料的时候需要做的工作!因为SYBYGreen染料是非特异的染料,只要有扩增,染料就可以镶嵌在双链中发出荧光.我们做溶解曲线是为了观察我们扩增发出荧光的片段是不是

在设置反应程序时,在最后加一步

打开软件-setup-advacedsetup-左手setup中第一行experimentproperties中有一项是whichreagentsdoyouwanttousetodetecttheta

用SyberGreen方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一.反应结束后,逐渐加温.和SyberGreen分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和SyberGreen结合.一般每加温

这个就是SYBRGREEN的局限了.你要做内参话,必须在不同的管子里面另外在同时做.就像楼下说的那样.这样的话,不同管子见的加样误差就会干扰实验数据.内参的目的就是来对照加样误差的.实际上,真正的内参

问题有可能如下：1）模板制备有问题.你可以用普通PCR扩增,然后电泳确定是不是模板有问题?2）引物问题：引物设计的好与否,对Realtime结果至关重要!可以用普通PCR确定你的引物扩增效率如何?模板

可以直接用DNA模板,只要DNA模板质量够好.

看标准曲线是否反映出了标准物质的真实浓度再问：那请问标准曲线中的R2代表什么意思？为什么说R2>0.99可信度就高？再答：R2决定系数，英文（coefficientofdetermination），有

是的啊!但是你要在一起上标注好哪个是标样以及重复,他就自动生成了再问：谢谢请问具体怎样设置最后才会自动出现标准曲线啊？？？再答：每个机器不一样我用的是biorad的，然后P上之前有一个面板显示96孔，

ROX加多了,终浓度太高?或者模板量,PCR扩增效率低下?

溶解曲线分析可以用来确定不同的反应产物,包括非特异性产物.扩增反应完成后,通过逐渐增加温度同时监测每一步的荧光信号来产生溶解曲线,随着反应中双链DNA变性,荧光染料又回复到游离状态导致荧光信号降低,用

可以看看有几个峰,以及峰出现的位置.每个峰代表有一种产物,如果有两个峰甚至多个峰,说明引物不特异,你得到的Ct值是不可信的.还有如果出现峰的温度低,很可能是Dimer,而不是你的目的产物.如果你相同样

如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的.1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,

溶解曲线是在正常的PCR反应基础上加一个溶解曲线的反应条件,其中当温度由60℃升至95℃时,PCR仪每隔一定的温度检测一次信号.最后将收集的信号绘制出溶解曲线,然后将溶解曲线一次微分就会得到我们平时看

如果有已知拷贝数的标准品的话就挺好做的加好体系,设一下程序,run.搞定

引物特异性不好,或者是模板有污染吧.

染料法的?大概引物特异性不好,有杂带或者二聚体,把反应板里的样跑个胶看看是不是,是的话就换引物吧

扩增效率E和R的平方