搜搜考试网定量pcr引物设计
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/29 17:25:02
这个不同的基因Taqman的探针不一样,它不是通用的,是专一性的,是某个基因的某段序列.然后你选一段小的位置来做为探针,两端分别加上发光基团与淬灭基团,正常情况下他们不发出信号,在PCR扩增的时候他就
Oligodt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链（就
完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你
你的realtimePCR扩增的是cDNA啊,因此用CDS序列啊.
请用primerexpress设计就行.你想去找非常保守的区域设计引物?可以,那你把这个物种的所有亚种的此段DNA序列做一个保守型分析就行.一般来说clustalX就可以了.再问：ClustalX排列
用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说
参照以下real-timePCR引物设计原则：1.最好位于编码区5’端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment软件看看结果.2.产物不能形成二级结构（自由能小于58.61KJ
楼主说的是扩增子,即两引物目标位点之间的序列长度.PCR过程中,扩增就跟修路一样,越长越费工.在能够保证特异性的情况下,当然是越短越有效率,100-200bp就是综合两方面的考虑而建议的最佳扩增子长度
使用引物设计软件,如果可以最好找公司设计合成,这样有保证.再问：老师要我们自己设计啦···杯具··再答：挺有难度，到网站上找一些设计原则看看。再问：谢谢啦，已经搞定啦··
如果你测定的基因序列未知,可以用同源基因或者别的物种的同类基因序列来设计引物,进行PCR,看看是否能够扩增出产物,并对产物进行确认,判断扩增的特异性.如果确认无误,就可以进行荧光定量PCR.再问：我想
貌似我做的时候引物没有考虑那么多似乎只要是在保守序列里的就可以所以引物会有很多组组合.我一直以来跑PCR后电泳也没发现带一般是摸版或者引物的问题几率比较大
最好不要有引物二聚体的产生
选取目标片段长度在80-250bp的引物,在回头BLAST,特异性良好的话就可以了,一般我会多设计几个,选取最好的那个~
18-25bp产物啊,半定量无所谓吧.这年头为什么还做半定量呢,直接做q-pcr也不贵啊,产物80到500bp,偶喜欢100-300bp的样子.
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段
一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.
用primerpremie
一、可以使用oligo6或者primer5等软件设计.用这些软件选择引物,主要就是看引物的稳定性,形成二聚体的可能性,退火温度等等参数.二、如果你的序列同源性不高,GC含量也还可以的话,可以使用一些经
NCBI有免费的设计软件非常好用,权威把你的序列贴到最上方的空格就可以了,开始的时候,所有的参数都用系统的默认值就可以,不需要修改.
你是直接用primer5设计的引物吗?有时候时会遇到你说的问题,你可以在软件设计出来的基础上,手动的把你的引物移动几个碱基,可以减少一些二聚体或错配,而且,软件给出来的这些结果都只是计算值,你实际应用