如果PCR扩增产物除预期长度的GFP条带外,还出现了额外条带

这样就P不出来的啊要换模板的必须要比目的基因要长再问：谢谢。只能重新设计了。

是分别和两条链配对的序列.你可以在纸上画一下,第一次扩增时假设可以从引物向另一端无限延伸,那第二个循环时以一端是上游引物片段的序列为模板,从另一端的下游引物延伸过来,延伸到和上游引物第一个碱基处就终止

第二次比如目的基因是300bps,母链DNA2000bpsforwardprimer从母链第25碱基开始由5'-3'开始复制,backwardprimer从第325由3'-5'开始反向复制.第一次复制

1.先看下PCR电泳图里杂带多不多,若有的话很可能非特异性扩增了2.若条带干净,仍然有可能存在非特异性扩增,引物特异性不高导致竞争结合可将DNA直接酶切看是否能切出你的目标片段3.序列比对结果不能只看

把这段基因输入设计软件里,调节引物位置,使变性温度在94度,退火温度=Tm-（5到10度）延伸温度72度左右,满足这些条件基本就可以了,当然还要根据实际情况多次实验得到最佳引物.如果你要扩增整个的基因

可以用,没有任何特别问题.实际上,如果你用过一些引物设计的软件,有时候你会发现,软件设计出来的引物长度有可能不同（当然,大部分时候是相同的）,这有可能是考虑的引物Tm,引物二聚体,引物非特异性结合等问

我个人感觉对PCR影响最大的是模板质量和退火温度,至于其他的影响因素那就太多了,模板纯度浓度,引物质量,体系中的物质（buffer,酶,Mg2+,dntp浓度）,退火和延伸温度.一般来讲,引物从ref

以PCR产物为模板,只要引物,体系对,怎么P怎么出.你的模板就是PCR产物,浓度再低也没事,稀释100倍没问题.没什么要注意的

解题思路：PCR技术解题过程：varSWOC={};SWOC.tip=false;try{SWOCX2.OpenFile("http://dayi.prcedu.com/include/readq.p

能说下原题么、

貌似没听说过,你的酶和dNTP买回来之后说明书上会给出你合适的体系,那个dNTP绝对都是足量的.

应该没有问题确认一下你的GCbuffer里边的试剂的背景会不会对你的PCR产物有干扰有问题的话只能努力洗洗柱子.

PCR产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子.也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带.如果只是进行PCR产物回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了.问题

非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一

PCR非特异性扩增指的是你进行PCR所扩增出来的条带不是所要的,引物与模板在非目的条带处有错配,导致延伸产物不是目的条带.非特异性扩增在琼脂糖电泳时可以看到在目的条带外出现了其他条带.引起非特异性扩增

目的基因是动物的相关基因片段PCR扩增的吗?你采用mRNA还是DNA啊?是扩增16SrDNA?不然怎么会显示杆菌的片段?BLAST比对如此奇怪?应该不会插入错误16组,估计实验操作的问题,或者使用NC

可分为长产物片段和短产物片段两部分.短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间,是需要扩增的特定片段.短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的,以一个原始模板为例,在第一个反应

你需要保存多久?我最多放过两三天,没问题再问：我周三晚上扩增出来的，结果给忘记放冰箱了，刚刚才放进去，后边要做DGGE，还可以用么？再答：不好意思DGGE实验我没有操作过。但是从理论上来说，2天不会降

PCR扩增出目的片段,需要自己提取模板,可以是RNA,或者DNA.引物会结合模板,如果特异性不够好,比如引物与模板的其他位点结合,在PCR过程中就会产生很多不同条带.

1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题