克隆载体PCR的模板是cDNA

你得到的cDNA的量是很少的,先放在克隆载体上是为了获得更多的你所需要的cDNA,这样做的话不至于在做完实验后突然发现你要的那个cDNA被你用完了,然后你又要重新再去很复杂的提取

原来扩增的时候就有两条带,回收的时候（是凝胶回收吗?）可能因为产物浓度过大,导致两条带没跑开,让你一起切下来了（回收后电泳检测了没?）,所以连接后有两种克隆.至于说为什么会出现两种克隆,要具体问题具体

不管酶切还是PCR,都是间接的结果.要确定克隆的正确,一定要测序的啊.你测个序,问题就迎刃而解了.到底是什么问题也就清楚了.再问：我前些天去遇到一样的问题，酶切鉴定正确，但测序后什么也不是呢再答：所以

目的基因和载体比例最好再核对一下,连接时间放久一点试试

克隆载体是环状双链DNA.PCR的原理：首先,当热变性,模板双链分开成两条单链模板然后,两条引物分别结合上各自的模板聚合酶,催化dNTP等进行引物延伸,成为两对长链模板,由于延伸的时间只够完成目的基因

DNA啊!PCR是以脱氧核糖核苷酸为原料的而MRNA的组成是核糖核苷酸原料都不同而且PCR技术的原理是利用DNA双链的原理.以MRNA为原料会得到双链的RNA

可以,RNA提取的质量要好,纯度要高

PCR必须有模板.　　通过RT-PCR获得胰岛素cDNA很麻烦,因为表达胰岛素mRNA的组织或细胞非常局限.你要么需要找到人的B细胞系（这个细胞系不好要也不好养）,要么需要联系医院获得人的胰腺组织.这

1.是的,一般加样量按质量算（微克）,同组样品一定要加一样多,否则无法横向比较.加样体积应精确至小数点后一位.2.不能.PCR本来就半定量了,不能再引入误差了.内参亮度不一致,没人会接受你的数据.

就是利用mRNA进行逆转录得到的DNA因为这些DNA不含有非编码区和内含子所以不是完整的原DNA于是成为cDNA克隆在这里就是逆转录的意思（或者理解为复制DNA）集合就是这些cDNA的组合在一起这样形

我的模板质粒非常异常,超螺旋的部分亮度太亮了.引物有一个也是用了好久的.我最近做拼接PCR也是弥散带,把所有的东西都换了一遍,锁定引物和模版.我的模板质粒非常异常,超螺旋的部分亮度太亮了.引物有一个也

cDNA克隆是以mRNA为原材料,经体外反转录合成互补的DNA(cDNA),再与载体DNA分子连接引入寄主细胞.每一cDNA反映一种mRNA的结构,cDNA克隆的分布也反映了mRNA的分布.特点是：①

不知你的目的是什么,估计你应该是检测某种细胞或组织中是否表达这种蛋白!首先你得知道此种蛋白质的核苷酸序列,从而设计引物,然后提取此细胞中的总mRNA,依此引物进行反转录特异性扩增你需要验证的蛋白质DN

目的基因是动物的相关基因片段PCR扩增的吗?你采用mRNA还是DNA啊?是扩增16SrDNA?不然怎么会显示杆菌的片段?BLAST比对如此奇怪?应该不会插入错误16组,估计实验操作的问题,或者使用NC

你是通过提RNA来得到基因的吧.cDNA是RNA逆转录成的DNA序列,与基因组相比没有内含子,就是说它是可以表达或者在表达的基因.

其实没有多大的区别,最大的区别可能是插入片段的大小,在用于构建打片段文库时,需要大容量的克隆载体,如噬菌体一类的；其他的包括复制子,选择标记等都没有区别参考：

你的引物是设计到这个基因编码区的什么位置的?你考虑下是不是cDNA的降解问题.还有你试验的时候降低退火温度,不要提高.提高更扩不出来了.

完全确保的话,第一,做酶切的两个酶要不一样；二你在做完酶切后,用磷酸化酶处理下,纯化后再连接（这一不会降低连接效率,但会确保质粒不自连.按正确方向克隆

没明白……cDNA作为互补DNA,就是以mRNA为模板通过RT-PCR合成得到的.所以,PCR产物在核酸电泳EB染色之后应该显示cDNA条带才对.你若问什么没得到这样的条带,那么很可能是你引物设计的问

应该是cDNA