做PCR的时候,根据合成的引物中的GC含量可以用公式计算

同楼上,当初我问老师这个问题时,他说大学才学这么深

正反向引物就是一个引物是从3端开始,另一个是从5端开始的.看分子生物学的书吧,里面有详细介绍DNA复制的啊,就是那些理论而已.解释的太简单了,我做过pcr扩增的实验,不懂得可以问我,我尽量回答.

不好意思,我没设计过引物,不过建议你到生物秀或是小木虫的论坛去看看,那里有很多这样的问题的

引物的设计一般要考虑以下几个问题：1.长度,至少要16bp,通常为18-30bp2.解链温度（Tm值）3.避免引物内部或引物之间存在互补序列（3个碱基）,从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的

你的realtimePCR扩增的是cDNA啊,因此用CDS序列啊.

一般PCR使用两条引物,前后各一条,与模版DNA结合上后,前后的引物形成复制起始位点,共同向中间扩增,直到连上,一次扩增完成.

做PCR是扩增DNA双链分子的..如果把DNA分子分为C,D两链DNA聚合酶只能合成5'-3'的DNA链.所以A引物是C链结合的B引物是D链结合的..这样才能高效扩增

因为GC之间有三个氢键,而AT之间只有两个氢键,因此GC含量越高,要打开氢键的能量就要求越大,即退火温度越高.PCR退火有的是根据GC含量估算Tm更详细说明次料：PCR引物应该保持合理的GC含量.含有

请用primerexpress设计就行.你想去找非常保守的区域设计引物?可以,那你把这个物种的所有亚种的此段DNA序列做一个保守型分析就行.一般来说clustalX就可以了.再问：ClustalX排列

一般的RT-PCR引物是不能用来做是实时荧光定量的的引物的,但是你可以设计出兼顾二者的引物,除了要注意一般引物设计的原则外,愚见认为还要注意下两个问题：

MspI酶,或者说任何DNA限制酶都有一个最适合的底物浓度去反应,我估计你的PCR产物浓度很大,你不妨考虑一下这一点.至于你说的酶切产物变大的这个问题,个人认为你用1%的胶去跑290bp的条带是测不准

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段

引物是自己向生化试剂公司订购,让公司按照自己的需要合成的.在PCR反应体系中,已经加入了引物,引物不是在PCR反应阶段生成的.

Tm指的是把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度.我们PCR时候,当然不能用Tm值来作为退火的温度.一般来说,退火温度比Tm值要低上5度左右.但是这个也不是绝对的.建议你如果说模板比较充足的话,做一个梯

其实就是PCR,做两次,把两段序列融合在一起,第一次PCR的时候,第一段序列的3'引物和第二段序列的5'引物要有一段互补区,然后用第一次PCR的产物做模板,第一段序列的5'引物

就是指引物与该匹配的目标模板以很高程度匹配（一般是100%）,衡量值是detaG的绝对值在适度的范围较高.而此引物在基因组其他位置没有配率很高的地方,衡量水平是detaG的绝对值越小越好.这样设计出来

跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.

pcr与引物的关系,pcr需要引物啊,其实引物就是扩增的目的片段两端的碱基互补序列.

那是显然的,所以在提rna做pcr的时候,如果里面混了基因组dna,那就有可能导致假阳性再问：谢谢，但是这不是我想要的答案。请问做半定量RT-PCR的引物怎么设计？可以设计在基因的非翻译区，然后扩非翻

第四项,Tm【℃】,三行分别是正义引物,反义引物和PCR产物的退火温度.再问：这我知道，在PCR的时候退火温度应该选哪个？再答：当然是看引物的了。设的时候应该让两条引物Tm值尽量接近，要是没办法选择，